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摘要
目的 探讨RNA去甲基化酶FTO在双酚S(bisphenol S,BPS)诱导小鼠精母细胞GC-2凋亡中的作用及机制。方法 采用终浓度为0(DMSO对照组)、20、40、80、160、320μmol/L的BPS处理小鼠精母细胞株GC-2细胞72 h,镜下观察细胞形态变化；采用CCK-8法检测细胞活力，通过流式细胞术检测细胞凋亡和周期改变；采用比色法检测RNA甲基化的总体水平；通过Western blot检测RNA甲基转移酶METTL3、RNA去甲基化酶FTO、 RNA甲基化识别蛋白YTHDF1和细胞凋亡相关分子P53、P21、BCL2、Caspase-9、Caspase-3、BAX以及细胞周期相关分子CyclinD1、CDK4、CDK2的蛋白表达水平。建立FTO基因干扰细胞模型，采用CCK-8法检测细胞活力，采用流式细胞术检测细胞凋亡改变，通过Western blot检测FTO和细胞凋亡相关分子P53、BCL2、BAX的蛋白表达水平。结果 与对照组相比，BPS染毒组GC-2细胞数量明显减少，出现较多的空泡细胞；细胞存活率呈下降趋势，尤其在160、320μmol/L BPS染毒剂量下降显著(P<0.05);细胞凋亡率显著升高，凋亡相关分子P53、P21、Caspase-9和Caspase-3蛋白水平显著增加，BCL2的蛋白水平显著下调(P<0.05);BPS浓度在80、160、320μmol/L时细胞周期阻滞在G_1/S期，细胞周期G_1/S期相关分子CyclinD1、CDK4、CDK2的蛋白水平显著下调(P<0.05);在80～320μmol/L BPS染毒剂量组下，RNA甲基化的总体水平显著升高(P<0.01);RNA甲基转移酶METTL3和RNA甲基化识别蛋白YTHDF1的蛋白水平无明显变化，而RNA去甲基化酶FTO的蛋白水平显著下降(P<0.05)。与对照组相比，干扰FTO表达后GC-2细胞数量明显减少，出现较多的空泡细胞，细胞活力显著降低(P<0.01);细胞凋亡率显著升高，P53的蛋白水平显著上调，BCL2的蛋白水平显著下调(P<0.05)。结论 RNA去甲基化酶FTO可能通过调控P53-P21和BCL2线粒体途径在BPS诱导的GC-2细胞凋亡过程中发挥重要作用。
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