产志贺毒素大肠杆菌O26多重双启动寡核苷酸引物-PCR检测方法的建立

作者：杨广珠; 张淑红; 黄远斌; 吴清平^*; 张菊梅

来源：现代食品科技, 2020, 36(04): 290-24.

DOI：10.13982/j.mfst.1673-9078.2020.4.038

• 产志贺毒素大肠杆菌O26
• DPO引物
• 三重PCR

为建立一种三重DPO-PCR方法用于食品样品中的产志贺毒素大肠杆菌O26的检测。以志贺毒素stx1和stx2、O抗原基因wzx O26特异性和实际检测效果,设计引物,构建三重DPO-PCR反应体系,进行特异性、灵敏度、模拟样品验证和实际样品验证。结果表明,三对DPO引物对退火温度不敏感,在49～69℃之间均能发生扩增,且引物之间干扰较小,具有较高的特异性,除目的基因外非目标细菌均无扩增条带出现,纯菌灵敏度检测表明,三重DPO-PCR方法对O26的最低检测限为3.8×103 cfu/g。在模拟样品和实际样品中具有良好的检测效果。本研究基于DPO引物构建的三重DPO-PCR方法具有效率高,特异性强,不受退火温度限制等优点,可用于食品样品中产志贺毒素大肠杆菌O26的快速准确检测提供一种高效的辅助检测方法。

• 单位
  广东省科学院; 广东省微生物研究所; 广东省微生物应用新技术公共实验室; 广东省菌种保藏与应用重点实验室