磷酸酶张力蛋白同源物基因表达下调对体外活化肝星状细胞p130Crk相关底物蛋白及桩蛋白信号转导的影响

作者：郝礼森^*; 张朋垒; 刘博; 章广玲; 陈静; 宋洁; 张明婷; 靳丽敏

来源：中华肝脏病杂志, 2019, 27(12).

• 肝纤维化
• 肝星状细胞
• 桩蛋白
• 信号传导

目的探讨腺病毒介导的短发夹RNA (shRNA)下调第10号染色体缺失的磷酸酶张力蛋白同源物基因(PTEN)表达对体外活化肝星状细胞(HSC)p130Crk相关底物蛋白(p130Cas)及桩蛋白信号转导的影响。方法体外培养活化大鼠肝星状细胞系HSC-T6, 以腺病毒为载体, 将靶向PTEN的shRNA瞬时转染体外活化HSC, 构建体外活化HSC的PTEN低表达模型;采用Western blot及实时荧光定量PCR技术检测活化HSC的PTEN、p130Cas及桩蛋白的蛋白及mRNA表达。实验分组:对照组:以DMEM代替腺病毒液转染HSC;Ad-绿色荧光蛋白(GFP)组:转染仅表达GFP的空病毒Ad-GFP;Ad-shRNA/PTEN组:转染携带靶向PTEN的shRNA并表达GFP的重组腺病毒Ad-shRNA/PTEN。多组间均数比较采用单因素方差分析, 组间比较采用LSD检验。结果靶向PTEN的shRNA成功转染并显著下调体外活化HSC的PTEN蛋白及mRNA表达(P < 0.05), 体外活化HSC的PTEN低表达模型成功构建。3组HSC的P130Cas RNA表达比较, 以对照组HSC的P130Cas mRNA表达量为1, 则Ad-GFP组和Ad-shRNA/PTEN组HSC的P130Cas mRNA相对对照组的表达倍数分别为1.01倍、1.52倍, Ad-shRNA/PTEN组HSC的P130Cas mRNA表达明显高于对照组及Ad-GFP组(P < 0.05), 而对照组与Ad-GFP组之间差异无统计学意义(P > 0.05);3组HSC的p130Cas蛋白表达比较, Ad-shRNA/PTEN组(0.93±0.08)高于对照组(0.74±0.07)及Ad-GFP组(0.72±0.02), P < 0.05, 而Ad-GFP组与对照组之间差异无统计学意义(P > 0.05)。3组HSC的桩蛋白mRNA表达比较, 以对照组HSC的桩蛋白mRNA表达量为1, 则Ad-GFP组及Ad-shRNA/PTEN组HSC的桩蛋白mRNA相对对照组的表达倍数分别为0.97倍、1.58倍, Ad-shRNA/PTEN组HSC的桩蛋白mRNA表达高于对照组及Ad-GFP组(P < 0.05), 对照组与Ad-GFP组之间差异无统计学意义(P > 0.05);3组HSC的桩蛋白蛋白表达比较, Ad-shRNA/PTEN组(0.91±0.05)高于对照组(0.46±0.03)及Ad-GFP组(0.50±0.04), P < 0.05, 而对照组与Ad-GFP之间差异无统计学意义(P > 0.05)。结论 PTEN表达下调可显著增强体外活化HSC的P130Cas及桩蛋白信号转导活性。

• 单位
  基础医学院; 华北理工大学; 生命科学学院