干扰基因BMI-1表达对食管癌细胞放射敏感性的影响

作者：杨兴肖; 李幼梅; 宋姮; 刘志坤; 马鸣; 祝淑钗

来源：中国癌症杂志, 2016, 26(09): 763-769.

DOI：10.19401/j.cnki.1007-3639.2016.09.007

• BMI-1基因
• RNA干扰
• X射线照射
• 放射敏感性
• p16基因
• CDK4基因

背景与目的:B细胞特异性的莫洛尼白血病毒插入位点1(B-cell-specific Moloney leukemia virus insertion site 1,BMI-1)期在放疗后DNA损伤中发挥重要作用。该研究采用siRNA干扰技术降低食管癌TE13细胞中BMI-1基因表达,探讨BMI-1的表达对X射线照射后食管癌细胞放射敏感性的影响。方法:针对BMI-1 mRNA序列,3对有效的干扰序列(siRNA1、siRNA2和siRNA3)和阴性对照序列由公司设计合成,瞬时转染食管癌TE13细胞,命名为BMI-1 siRNA1、BMI-1 siRNA2和BMI-1 siRNA3共3组,转染阴性对照序列组命名为NC组,未转染组命名为对照组。采用反转录聚合酶链反应(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)和蛋白[质]印迹法(Western blot)检测TE13各组中BMI-1在mRNA和蛋白水平的表达。采用MTT法检测BMI-1基因转染对TE13细胞增殖能力的影响。克隆形成实验检测BMI-1对TE13放射敏感性的作用。流式细胞术测定siRNA干扰BMI-1基因对细胞周期和凋亡分布的影响。RT-PCR和Western blot检测细胞内p16、CDK4基因和蛋白表达水平。结果:3对干扰序列使人BMI-1基因在mRNA和蛋白表达水平低于对照组和NC组,尤以siRNA3组效果最明显。选择siRNA3作为干扰组进行MTT和流式细胞术。MTT结果表明,BMI-1 siRNA3转染后BMI-1的低表达对细胞的增殖能力无明显影响;克隆形成实验的结果显示,空白对照组、NC组、干扰组的D0分别为2.514、2.506和1.761 Gy;Dq值分别为2.694、2.664和2.122 Gy;外推数N值分别为2.920、2.895和3.336;SF2值分别为0.826 8、0.823 1和0.625 5,可见对照组和空载组间放射敏感性差异无统计学意义(P>0.05),而干扰组细胞的放射敏感性高于对照组和NC组;流式细胞术分析显示,6 Gy照射后,BMI-1 siRNA组G0/G1期比例明显高于对照组和空载组,G2/M期显著低于对照组和NC组,而未照射时BMI-1的低表达对细胞周期无明显影响。干扰BMI-1基因后TE13细胞p16基因和蛋白水平升高(P<0.01),CDK4基因和蛋白表达水平显著降低(P<0.01)。结论:siRNA干扰技术有效地抑制了食管癌细胞TE13中BMI-1基因的表达,联合X线照射后显著消除了细胞周期在G2/M期的阻滞,增加了食管癌的放射敏感性,其诱导作用与p16和CDK4基因和蛋白表达有关。

• 单位
  河北医科大学第四医院