一种发育期皮质脊髓投射神经细胞基因表达谱的研究方法

作者：曲春生; 赵月娥; 陈嘉琦; 高英

来源：中国细胞生物学学报, 2016, 38(06): 709-714.

• 皮质脊髓投射神经元
• 激光捕获显微切割技术
• 发育
• 基因表达谱

皮质脊髓投射神经细胞(cortico-spinal projection neurons,CSPN)对于大脑的功能非常重要,但目前还缺乏研究小鼠发育期CSPN基因表达谱的有效方法。将出生后2 d(P2)的小鼠在脊髓交叉处注射逆行标记的神经示踪剂,并在P8时进行激光显微切割。提取捕获细胞的RNA并线性放大,而后利用定量PCR进行皮层标记基因的验证,线性放大后的RNA与大脑皮层组织的RNA相比,第五皮层标记基因Fezf2(Fez family zinc fi nger 2)表达明显升高,第四、第六皮层标记基因Rorβ(RAR related orphan receptorβ)、Foxp2(forkhead box P2)的表达相对较低。之后,进行小鼠基因芯片表达谱检测,通过基因功能富集度分析发现,在CSPN中大多数富表达的基因都与G蛋白偶联受体信号通路以及运动行为有关。而且,染色质的修饰和编排相关基因在CSPN里也有富集表达。通过定量PCR进一步验证了芯片中CSPN的富集基因,结果发现,Meg3(maternally expressed gene 3)等7个基因在大脑第五皮层表达丰富。该研究将在体神经细胞荧光标记、激光捕获显微切割、RNA线性放大、基因芯片及定量PCR等多种技术结合起来,提供了一种研究发育期小鼠CSPN基因表达谱的方法。

• 单位
  温州医科大学; 丽水市中心医院; 丽水市人民医院