重组Bb(pGEX-OprF-I)疫苗的构建及对小鼠的诱导保护作用

作者：梁诚诚; 李文桂^*

来源：细胞与分子免疫学杂志, 2019, 35(07): 589-594.

DOI：10.13423/j.cnki.cjcmi.008835

• 铜绿假单胞菌
• 两歧双歧杆菌
• 疫苗
• 免疫保护

目的构建和鉴定重组两歧双歧杆菌介导的铜绿假单胞菌外膜蛋白F-I[rBb(pGEX-OprF-I)]疫苗,研究其对小鼠抗铜绿假单胞菌感染的免疫保护作用。方法 PCR扩增OprF和OprI基因,采用基因拼接法剪切,得到OprF-I融合基因,双酶切后定向克隆至载体pGEX-1λT,构建重组质粒pGEX-OprF-I,将该质粒电转化两歧双歧杆菌(Bb),构建rBb(pGEX-OprF-I)疫苗并进行双酶切和PCR鉴定,经异丙基-β-D硫代-吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导表达, SDS-PAGE和Western blot法分析和鉴定表达产物。将21只BALB/c鼠随机分成疫苗组、 Bb-pGEX-1λT空载体和Bb对照组,取5×108菌落形成单位(CFU)疫苗口服灌胃,每周连续接种3 d,持续3周。初次免疫后4周用5×107 CFU PA01株滴鼻攻击,攻击后2周无菌杀鼠,计数肺组织的细菌菌落数。常规ELISA检测免疫前、初次免疫后4周和攻击后2周的小鼠静脉血中IgG水平。结果 PCR扩增出1289 bp的OprF-I融合基因;双酶切和PCR鉴定证实该基因插入pGEX-1λT并转化Bb,成功构建rBb (pGEX-OprF-I)疫苗; SDS-PAGE显示该疫苗经IPTG诱导可表达相对分子质量(Mr)约68 000的融合蛋白; Western blot表明该蛋白能被铜绿假单胞菌感染的鼠血清特异性识别。疫苗组的肺组织细菌菌落数较对照组明显减少;免疫小鼠血清IgG水平在初次免疫后4周和攻击后2周依次升高,且高于同一时间点的其余对照组。结论成功构建了铜绿假单胞菌rBb(pGEX-OprF-I)疫苗,该疫苗在小鼠抗铜绿假单胞菌感染过程中可产生一定的免疫保护作用。

• 单位
  重庆医科大学附属第一医院