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摘要
背景:Ⅲ型纤连蛋白结构域包含蛋白5(fibronectin typeⅢdomain containing 5,FNDC5)属于一种肌肉因子,主要表达于骨骼肌及其他肌肉较多的组织中,可通过结合不同受体影响多种细胞增殖与迁移。目的:构建过表达FNDC5基因的慢病毒载体,获得稳定转染FNDC5的平滑肌细胞系,并观察其对平滑肌细胞增殖与迁移的影响。方法:①体外培养血管平滑肌细胞,经鉴定合格后传代培养。②PCR扩增目的基因FNDC5,将目的基因构建入pLVX-mCMV-ZsGreen-IRESPuro慢病毒载体中,在JM109感受态细胞中进行扩增,测序及鉴定合格后转染293T细胞,包装成过表达慢病毒颗粒并测定病毒滴度。将获得的重组慢病毒转染平滑肌细胞系,倒置荧光显微镜下观察细胞形态并计算转染效率,嘌呤霉素筛选获得稳转平滑肌细胞株。③将平滑肌细胞分为3组,分别为对照组、空载组和FNDC5过表达组,Real-time PCR和Western blot检测各组平滑肌细胞FNDC5 mRNA及蛋白表达,CCK-8和细胞划痕实验检测各组平滑肌细胞增殖活性及迁移能力。结果与结论:①成功构建FNDC5过表达慢病毒,并得到稳定转染的平滑肌细胞株,平滑肌细胞转染效率为86%;②与对照组、空载组比较,FNDC5过表达组FNDC5 mRNA及蛋白表达显著升高(P <0.001);③与空白组、空载组比较,FNDC5过表达组细胞增殖活性、迁移率明显下降(P <0.05);④结果显示,得到FNDC5稳定转染的平滑肌细胞株,FNDC5过表达可抑制平滑肌细胞增殖与迁移。
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