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摘要
本研究旨在评估巴氏杆菌糖酵解酶全部9个成员作为抗原对巴氏杆菌的免疫保护效应。通过PCR扩增出多杀性巴氏杆菌C51-17株糖酵解酶的基因并将其连接到pET-28a(+)质粒上。重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)工程菌后进行过夜诱导表达,收集菌体,超声破碎后取上清,纯化出巴氏杆菌糖酵解酶的重组蛋白。将巴氏杆菌糖酵解酶进行SDS-PAGE后转入PVDF膜上,孵育C51-17株感染康复血清,孵育二抗后进行ECL显色。将糖酵解酶免疫C57BL/6小鼠,待免疫组均产生高水平特异性抗体后使用C51-17株攻毒,比较各组存活率。测序结果显示,本研究成功将巴氏杆菌糖酵解酶全部9个成员的基因克隆到pET-28a(+)质粒上,经诱导表达和纯化成功获得了巴氏杆菌糖酵解酶的重组蛋白。Western blotting结果显示,磷酸葡萄糖异构酶(PGI)、丙糖磷酸异构酶(TPI)、甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GPD)、磷酸甘油激酶(PGK)、丙酮酸激酶(PYK)能与巴氏杆菌C51-17株感染康复血清反应。免疫保护力试验显示,PGI、醛缩酶(ALD)、GPD、PGK、磷酸甘油酸变位酶(PGM)、烯醇化酶(ENO)具有一定的免疫保护作用。本研究结果表明,巴氏杆菌糖酵解酶部分成员具有一定程度的免疫保护作用,为巴氏杆菌病防控研究提供了新的依据。
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