摘要
目的 探讨黄芪多糖(APS)对黄嘌呤氧化酶(XOD)诱导的肺癌A549细胞自噬模型及磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(PI3K/Akt/mTOR)信号通路的影响及对自噬相关调节因子表达。方法 实验分为6组:正常组、模型组(20 U·L-1 XOD处理24 h)、低、中、高3个浓度实验组(在模型组基础上分别使用100,200和400 mg·L-1 APS进行处理)及3-MA抑制组(在模型组基础上使用2 mmol·L-1 3-甲基腺嘌呤进行处理)。以免疫荧光法检测自噬相关蛋白,以蛋白质印迹法检测PI3K/Akt/mTOR信号通路蛋白,以实时荧光定量聚合酶链反应法检测mRNA的表达水平。结果 正常组、模型组、高浓度实验组及3-MA抑制组的微管相关蛋白1轻链3B(LC3B)的蛋白荧光强度分别为6 368.50±17.90,2.57×104±224.03,7 443.00±19.20和8 356.50±18.52;抗坏死骨片1(P62)的蛋白荧光强度分别为2.86×104±194.85,3 225.50±12.69,1.04×104±209.50和1.04×104±96.78。这4组的PI3K的蛋白相对表达水平分别1.11±0.05,1.93±0.06,1.30±0.04和1.40±0.08;这4组的Akt蛋白表达水平为0.64±0.06,0.27±0.06,0.50±0.09和0.66±0.03;这4组的mTOR蛋白表达水平为1.94±0.06,0.93±0.06,1.28±0.03和0.91±0.04;这4组的Beclin1蛋白表达水平为0.48±0.04,1.03±0.04,0.77±0.09和0.65±0.09。mRNA表达的趋势与蛋白一致。自噬相关调节因子(LC3B、P62、Beclin1)及PI3K、Akt、mTOR信号因子,模型组与正常组相比,或高浓度实验组与模型组相比,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论 黄芪多糖防治肺癌的分子机制之一可能是通过调节PI3K/Akt/mTOR信号通路,抑制肺癌A549细胞自噬而发挥作用。
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单位第一临床医学院; 甘肃中医药大学; 基础医学院