旱半夏ISSR-PCR反应体系的优化

作者：喻娜^*; 唐宇翀; 刘勇; 戴炜

来源：分子植物育种, 2022, 20(01): 225-231.

DOI：10.13271/j.mpb.020.000225

• 旱半夏(Pinellia ternata)
• ISSR-PCR
• 优化

为了建立和完善旱半夏的ISSR-PCR反应体系,本研究以四川地区野生旱半夏为试验材料。以旱半夏整株的基因组DNA为模板,初筛的UBC818号引物用于ISSR-PCR体系,采用正交实验L16(45)并结合单因素实验方法对体系进行优化。通过正交试验结果直观评分可知各因素对该实验结果的影响强度从高到低依次为:d NTPs,引物,Mg2+,Taq DNA聚合酶,DNA模板;单因素实验结果表明,最优的20μL反应体系为:d NTPs 0.2 mmol/L,引物0.8μmol/L,Mg2+2.0 mmol/L,Taq DNA聚合酶0.075 U/μL,DNA模板15 ng,退火温度为56℃。本研究通过优化ISSR-PCR反应体系,此体系将应用于半夏组培苗遗传稳定性的检测。

• 单位
  广安职业技术学院