超声波辅助Urea-Free试剂结合热变性快速酶解蛋白质

作者：李雅萍; 李友元; 周新文; 陈长华; 张嗣良; 杨芃原

来源：分析化学, 2010, (05): 663-667.

• 超声波辅助
• 热变性
• 蛋白质
• 酶解
• 质谱 Ultrasound-assisted
• Thermal denaturation
• Protein
• Enzymatic proteolysis
• Mass spectrometry

建立了一个超声功率-超声时间的安全区域,在此范围内进行超声波辅助酶解时,能避免超声波随机断裂蛋白质;在此安全区域内采用响应面法获得最佳超声功率和超声时间。建立了超声波辅助Urea-Free试剂结合热变性快速酶解蛋白质的方法,将蛋白质依次进行10min超声波浴辅助Urea-Free还原烷基化反应、90℃热变性15min,超声波辅助胰蛋白酶酶解15s。应用此快速酶解方法鉴定3种典型标准蛋白质(牛血清白蛋白、细胞色素C和肌红蛋白),在25min内达到与传统整夜酶解方法相同的鉴定结果,并获得更高的序列覆盖率。

• 单位
  华东理工大学; 生物反应器工程国家重点实验室; 复旦大学