基于液相色谱-同位素稀释质谱法测定氨基酸的蛋白质定量方法

作者：李永利; 高艳秋; 薛民杰; 郝玉红; 李杰^*

来源：同位素, 2023, 36(06): 598-604.

• 液相色谱-串联质谱法
• 同位素稀释质谱法
• 氨基酸
• 蛋白质

为定量分析蛋白质，建立蛋白质水解液中氨基酸的液相色谱-同位素稀释质谱分析方法。蛋白质在6 mol/L盐酸溶液存在下130℃水解，经Hypercarb多孔石墨碳色谱柱、0.1%全氟戊酸水溶液/乙腈流动相体系分离，选择脯氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、苯丙氨酸5种较为稳定的氨基酸，以其相应的稳定同位素标记物为内标括号法定量，结合蛋白质的氨基酸序列信息实现对蛋白质的绝对定量。结果表明，5种氨基酸在10～1 000 ng/mL范围内线性关系良好(R2>0.995),检出限和定量限分别在0.02～0.07 ng/mL和0.06～0.2 ng/mL之间，3个不同质量水平下经水解处理的回收率在97.0%～102.4%之间、相对标准偏差在1.1%～3.0%之间。对新型冠状病毒(新冠病毒)N蛋白人源IgG单克隆抗体有证标准物质的分析结果和新冠病毒N蛋白国家计量比对的测量结果满意，证明该方法具有足够的准确度。

• 单位
  上海市计量测试技术研究院