PNPLA3基因表达以及干扰腺病毒的构建及鉴定

作者：乔爱君; 方福德; 常永生

来源：基础医学与临床, 2011, (05): 485-489.

DOI：10.16352/j.issn.1001-6325.2011.05.001

• PNPLA3
• 过表达
• 干扰
• 腺病毒 PNPLA3(patatin-like phospholipase domain-containing 3)
• overexpression
• interference
• adenovirus

目的构建糖脂代谢和脂肪肝相关基因PNPLA3过表达以及干扰腺病毒载体并加以鉴定。方法根据PNPLA3基因序列设计过表达以及干扰序列引物,定向克隆入穿梭载体pAdTrack-CMV的BglⅡ和XhoⅠ位点,干扰序列克隆入pAdTrack-U6穿梭载体,PmeⅠ酶切线性化穿梭质粒与腺病毒载体(pAdEasy-1质粒)共转化E.coliBJ5183感受态细菌产生重组腺病毒载体,用PacⅠ酶切线性化的回收质粒转染293A细胞包装腺病毒颗粒,在倒置荧光显微镜下观察293A细胞绿色荧光蛋白的表达,并初步观察其感染小鼠原代细胞的效率。结果测序、酶切鉴定证实,构建出了PNPLA3基因过表达及干扰腺病毒载体。包...

• 单位
  北京协和医学院; 医学分子生物学国家重点实验室; 中国医学科学院基础医学研究所