不同浓度脂多糖对脓毒症急性肺损伤肺上皮细胞坏死性凋亡和线粒体自噬的影响

作者：陈祝桂; 彭志勇; 张智豪; 梁青春; 刘瑞蒙; 张良清^*; 刘友坦^*

来源：中华实用诊断与治疗杂志, 2020, 34(04): 330-333.

DOI：10.13507/j.issn.1674-3474.2020.04.002

• 脓毒症
• 急性肺损伤
• 坏死性凋亡
• 线粒体动力相关蛋白1
• 线粒体自噬

目的观察不同浓度脂多糖(lippopolysaccharide, LPS)对肺上皮细胞坏死性凋亡和线粒体动力学相关蛋白1(dynamin related protein 1, Drp1)依赖的线粒体自噬的影响,探讨LPS制作脓毒症急性肺损伤模型的合适浓度。方法对数生长期A549细胞分为对照组、5 mg/L LPS组、10 mg/L LPS组、25 mg/L LPS组、50 mg/L LPS组,5 mg/L LPS组、10 mg/L LPS组、25 mg/L LPS组、50 mg/L LPS组分别采用PBS稀释的5、10、25、50 mg/L LPS处理16 h,对照组给予等体积PBS培养16 h。采用Western blot法检测各组细胞坏死性凋亡标志蛋白p-RIP3、RIPK1、p-MLKL和肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor, TNF)-α以及线粒体自噬标志蛋白PINK1、LC3B、Drp1、p-Mfn2相对表达量,并采用JC-1线粒体探针检测线粒体膜电位。结果 10、25、50 mg/L LPS组细胞p-RIP3、RIPK1、p-MLKL、TNF-α、PINK1、Drp1、LC3B蛋白相对表达量依次增高(P<0.05),且均高于5 mg/L LPS组和对照组(P<0.05)。10、25、50 mg/L LPS组p-Mfn2蛋白相对表达量(1.043±0.085、0.844±0.085、0.204±0.040)和细胞线粒体膜电位(7.323±0.331、6.429±0.456、4.661±0.456)依次降低(P<0.05),且均低于5 mg/L LPS组(1.288±0.035、9.013±0.648)和对照组(2.497±0.440、14.392±1.216)(P<0.05)。5 mg/L LPS组细胞p-RIP3、RIPK1、p-MLKL、TNF-α、PINK1、LC3B蛋白相对表达量高于对照组(P<0.05),p-Mfn2蛋白相对表达量和细胞线粒体膜电位低于对照组(P<0.05),Drp1蛋白相对表达量与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 10～50 mg/L LPS可诱导肺上皮细胞发生坏死性凋亡,可能与Drp1依赖的线粒体自噬有关;10～50 mg/L LPS可能是建立脓毒症急性肺损伤细胞模型的较合适浓度。

• 单位
  广东医科大学附属医院; 南方医科大学深圳医院