猪IL-2基因在毕赤酵母中的高效表达及生物活性分析

作者：陈国华; 贾怀杰; 曾爽; 房永祥; 李小庆; 景志忠; 才学鹏

来源：畜牧兽医学报, 2011, (04): 551-556.

• 猪IL-2基因
• 毕赤酵母
• 活性分析 porcine interleukine 2 gene
• Pichia pastoris
• bioactivity analysis

本研究根据密码子偏爱原则设计猪IL-2引物,克隆其基因后构建pPIC9k-IL-2重组表达载体,线性化后电转化毕赤酵母GS115,获得优化密码子的重组酵母转化子;再用G418抗性梯度法筛选得到多拷贝重组菌株,不同条件下进行甲醇诱导表达。结果表明:经PCR鉴定IL-2基因已整合到酵母基因组中。表达产物经SDS-PAGE电泳分析发现相对分子质量为16、20ku两条目的蛋白表达带,脱糖基化分析表明目的蛋白得到了适度的糖基化修饰,Western blotting分析显示表达的蛋白具有良好的免疫反应性,分子筛纯化可以获得纯度为95%的蛋白质,淋巴细胞增殖活性分析表明所得的蛋白质具有促淋巴细胞增殖的活性。...

• 单位
  农业部; 家畜疫病病原生物学国家重点实验室; 中国农业科学院兰州兽医研究所