Ku80基因RNAi逆转录病毒载体的构建及稳定转染人肾癌786-O细胞株的建立

作者：戚德峰; 胡渊; 曾国华; 纪卫东

来源：现代泌尿生殖肿瘤杂志, 2013, (05): 298-301.

• Ku80
• 逆转录病毒载体
• RNA干扰
• 肾肿瘤 Ku80
• Retroviral vector
• RNA interference
• Kidney neoplasms

目的构建并鉴定逆转录病毒介导的Ku80基因RNA干扰表达体系,并建立稳定、高效、长久低表达Ku80的人肾癌786-O细胞株。方法针对Ku80基因,设计并合成3对特异性RNA干扰靶序列,退火形成双链DNA,与BglⅡ和HindⅢ双酶切后的pSUPERretro-puro载体连接,构建pSUPERretro-puro-siKu80干扰表达载体,并对重组载体进行测序鉴定。筛选出基因沉默效应最强的干扰序列后使用磷酸钙法共转染293FT细胞,产生的病毒颗粒随后感染786-O细胞,经嘌呤霉素筛选得到阳性克隆。用RT-PCR检测Ku80基因mRNA表达,Western blot测定转染后786-O细胞中Ku...

• 单位
  广州医科大学附属第一医院