MYSM1全长及截短质粒构建及其对乳腺癌细胞增殖的影响

作者：栾瑞娜; 王安琦; 郭兆刚; 赵越^*

来源：热带医学杂志, 2023, 23(10): 1341-1336.

• 乳腺癌
• MYSM1
• 质粒构建
• 细胞定位
• 增殖

目的 构建去泛素化酶Myb样SWIRM和MPN结构域1(MYSM1)全长及各结构域缺失的截短表达质粒并验证其在乳腺癌细胞MCF7中的表达与定位，探讨MYSM1对MCF7细胞增殖能力的影响并初步评估相关机制。方法 以人基因组DNA为模板扩增MYSM1基因片段，构建其全长及截短质粒。将测序结果正确的上述MYSM1质粒分别转染于MCF7细胞中，进行免疫荧光共聚焦实验探究外源MYSM1蛋白在乳腺癌细胞中的定位。MTS和平板克隆实验检测对照或MYSM1过表达后，MCF7细胞的增殖能力。STRING数据库预测及免疫共沉淀实验验证MYSM1与E2F1蛋白结合；Western blot检测转染MYSM1后的E2F1蛋白表达及H2A泛素化水平。结果 构建出了FLAG-MYSM1全长及截短质粒；MYSM1全长及截短重组质粒均能在乳腺癌细胞中表达并定位于细胞核；过表达MYSM1后，细胞生长加快，且与对照组相比差异有统计学意义（t=6.389,P<0.01）;MYSM1能够结合并上调E2F1表达；过表达MYSM1后，H2A泛素化水平显著降低。结论 MYSM1蛋白的168-371 aa及471-576 aa在其核定位中发挥重要作用。MYSM1结合并增加E2F1表达，发挥促进MCF7细胞增殖的作用。

• 单位
  生命科学学院; 中国医科大学