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摘要
目的:探讨miR-30d拮抗剂(antagomir-30d)正性调控大鼠骨髓基质干细胞(BMSCs)的成骨分化作用并确认转染的最佳浓度。方法:BMSCs培养并分组,分为不同浓度的antagomir-30d(antagomir-30d组)、阴性对照(NC组)和未做转染的BMSCs(空白组);将不同浓度的antagomir-30d及其NC转染至BMSCs后进行成骨诱导。通过RT-PCR技术进行比较,测定成骨基因碱性磷酸酶(ALP)、骨钙素(OC)、Runt相关转录因子2(RUNX2)的mRNA的表达情况,并确定最佳转染浓度及其转染效率。通过ALP染色验证antagomir-30d对成骨分化的调控作用。结果:RT-PCR结果表明,antagomir-30d体外可以促进BMSCs的成骨分化。不同浓度antagomir-30d组的成骨基因表达量随浓度变化而改变,当antagomir-30d转染浓度为150 nmol/L时,ALP、OC、RUNX2的mRNA水平均显著高于空白组和NC组(P<0.05)。Antagomir-30d的转染最佳浓度为150 nmol/L,此时ALP染色结果显示其活性最高,成骨分化作用好。结论:Antagomir-30d体外正性调控BMSCs的成骨分化,其转染至BMSCs的最佳浓度为150 nmol/L。
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