沉默RANK真核表达载体的构建及有效干扰序列的筛选

作者：董彬; 马若凡; 陈炎; 许杰; 丁悦; 董文武; 李卫平

来源：中华关节外科杂志(电子版), 2010, 4(05): 645-652.

DOI：10.3969/cma.j.issn.1674-134X.2010.05.013

• RANK基因
• RNA干扰
• 小鼠
• 骨髓
• 巨噬细胞 RANK gene
• RNA interference
• Mice
• Bone marrow
• Macrophages

目的构建沉默小鼠RANK基因的真核表达载体pSuper-shRANK,筛选沉默RANK的最佳干扰序列。方法针对小鼠RANK基因设计并合成3对干扰序列,将其连接到真核表达载体pSuper上,酶切及测序鉴定正确后命名为pSuper-shRANK,后将其用脂质体瞬时转染小鼠骨髓巨噬细胞,用荧光显微镜观察转染情况,用Real-timePCR和Westernblot分析干扰效率。结果酶切分析与测序结果表明重组载体pSuper-shRANK构建成功,脂质体共转染后,Real-timePCR和Western blot分析结果显示shRANK-3干扰效果最好,干扰效率达88.7%,筛选出shRANK-3为最佳...

• 单位
  中山大学孙逸仙纪念医院; 山西省运城市中心医院