KRAS G12V特异性T细胞受体治疗恶性肿瘤的临床前研究

作者：程晓静; 蒋栋; 张连海; 王江华; 李雅真; 翟佳慧; 闫宝琪; 张露露; 谢兴旺^*; 李子禹^*; 季加孚^*

来源：北京大学学报(医学版), 2022, 54(05): 884-895.

DOI：10.19723/j.issn.1671-167X.2022.05.016

• 肿瘤
• 肿瘤浸润淋巴细胞
• DNA突变分析
• T细胞受体

目的：KRAS G12V是最为常见的KRAS突变类型之一，是一个T细胞表位抗原，目前尚无针对该位点的靶向药物，本研究旨在克隆能够特异性识别该表位抗原的T细胞受体(T cell receptor, TCR),通过体内外实验对该TCR基因修饰T细胞(TCR engineered T cells, TCR-T)靶向KRAS G12V突变肿瘤的安全性和有效性进行评估。方法：从1例结直肠癌患者的肿瘤浸润淋巴细胞中获得靶向KRAS G12V8-16表位的高亲和力TCR序列，构建该TCR慢病毒载体并感染人源T细胞，获得TCR-T。采用抗原肽激活、γ-干扰素(interferon-γ, IFN-γ)酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)、T细胞体外增殖等实验，体外评价该TCR-T的免疫杀伤活性和脱靶-交叉反应性；通过体内实验评价该TCR-T的抑瘤效果、安全性等指标。结果：获得了能特异性识别HLA-A*11:01限制性KRAS G12V8-16表位的高亲和力TCR序列KVA11-01。KVA11-01 TCR-T能够显著杀伤体外过表达HLA-A*11:01和KRAS G12V的多种肿瘤细胞。非特异杀伤实验显示，KVA11-01仅杀伤同时表达HLA-A*11:01和KRAS G12V的肿瘤细胞。体内抑瘤实验显示，KVA11-01 TCR-T可以显著抑制PANC-1和HeLa(体外过表达HLA-A*11:01和KRAS G12V)细胞裸鼠皮下移植瘤的生长。TCR-T细胞可以显著浸润至肿瘤组织内部，有良好的实体肿瘤归巢能力。结论：KVA11-01 TCR-T能够在体内外有效靶向并杀伤携带KRAS G12V突变的多种恶性肿瘤细胞，具有良好的实体瘤组织归巢能力，KVA11-01 TCR-T有望成为携带KRAS G12V突变的实体恶性肿瘤患者的有效治疗手段。

• 单位
  北京市肿瘤防治研究所; 恶性肿瘤发病机制及转化研究教育部重点实验室