人β-NGF真核表达载体的构建及其表达产物的生物活性

作者：陈勇; 蒋琳; 杨军; 李萍; 梁凌宇; 沈心亮; 谢云飞

来源：中国生物制品学杂志, 2005, (06): 17-20.

DOI：10.13200/j.cjb.2005.06.17.cheny.005

• 人神经生长因子
• 基因表达
• CHO细胞
• 二氢叶酸还原酶

目的在CHO细胞中共表达二氢叶酸还原酶(DHFR)基因及人神经生长因子β亚基(-βhNGF)基因,并对表达产物进行鉴定和生物活性分析。方法克隆DHFR和-βhNGF基因,测序,酶切,连接到真核表达载体pBudCE4.1中,构建人NGF基因重组表达质粒pBudCE4.1/DHFR/-βhNGF,经电转染法导入二氢叶酸还原酶缺陷型中国仓鼠卵巢细胞(CHO-DHFR-)中,经添加Zeocin抗生素和撤除H、T(次黄嘌呤、胸腺嘧啶脱氧核苷)双筛选,获得了DHFR+细胞克隆。经MTX加压筛选高表达-βhNGF的CHO细胞株。SDS-PAGE、ELISA和Western blot对表达产物进行鉴定,并利用鸡胚背根神经节法检测表达蛋白的生物活性。结果人神经生长因子在CHO细胞中得到较高表达,表达量达0.3μg/ml,且表达产物具有良好的生物活性。结论为大规模工业化生产重组人神经生长因子奠定了基础。

• 单位
  兰州生物制品研究所; 中国协和医科大学