miRNA-455-5p对人结肠癌HT-29细胞株PIK3R1基因靶向调控作用的研究

作者：柯孔亮^*; 王金秋; 楼婷婷; 张鲁青; 缪淳迪; 郭宇

来源：浙江医学, 2020, 42(07): 650-659.

• 结直肠癌
• 逆转录
• 靶基因
• 生物学特性

目的探讨miRNA-455-5p对人结肠癌HT-29细胞株磷脂酰肌醇三激酶调节亚单位α(PIK3R1)基因靶向调控的作用。方法培养HT-29细胞并用脂质体转染试剂进行转染,利用实时定量逆转录-聚合酶链反应、免疫印迹试验分别检测miRNA-455-5p上下调后PIK3R1及PI3K/AKT信号通路的PI3K下游效应分子(AKT1、MTOR)的基因及蛋白相对表达量。构建PIK3R1的3′非编码区(3′UTR)报告载体,利用双荧光素酶报告基因实验验证PIK3R1基因是否为miRNA-455-5p靶基因。结果与模拟剂对照组比较,上调miRNA-455-5p能抑制HT-29细胞中PIK3R1、AKT1、MTOR m RNA及蛋白的表达(均P<0.05);与抑制剂对照组比较,抑制miRNA-455-5p能促进HT-29细胞中PIK3R1、AKT1、MTOR m RNA及蛋白的表达(均P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验可获得测序验证正确的PIK3R1的3′UTR报告载体。hsa-miRNA-455-5p与psicheck3-gluc-PIK3R1-3′UTR-WT-fluc共转染293细胞48h后检测得到的分泌型荧光素酶/非分泌型荧光素酶(Gluc/Fluc)值较mimics-N与psicheck3-gluc-PIK3R1-3′UTR-WT-fluc共转染48h后得到的值明显降低(P<0.05)。结论 miRNA-455-5p对人结肠癌HT-29细胞株PIK3R1基因存在负向调控作用,PIK3R1基因是miRNA-455-5p调控的靶基因。

• 单位
  宁波市第一医院