脓毒症患者中性粒细胞胞外诱捕网的定量研究

作者：俞秋兴; 张勇; 杜鸿; 张海方^*

来源：中华实验外科杂志, 2021, 38(11).

• 脓毒症相关凝血功能障碍
• 中性粒细胞胞外诱捕网
• 受试者工作特征曲线

目的建立流式细胞术(FCM)检测中性粒细胞胞外诱捕网(NETs)的表达方法, 探讨NETs在脓毒症相关凝血功能障碍(SAC)患者中的临床诊断价值。方法收集2018年5月至2019年6月苏州大学附属第二医院50例非脓毒症者和21例脓毒症患者抗凝血。脓毒症患者符合3.0定义的诊断标准, 血培养鉴定出革兰氏阴性菌, D二聚体含量>0.5 mg/L, 彩色多普勒超声检查显示血栓形成, 即时收集外周血样。采用别藻蓝蛋白(APC)标记的白细胞分化抗原66b(CD66b)识别多型分叶核细胞(PMNs), 异硫氰酸荧光素(FITC)标记的抗髓过氧化物酶(MPO)抗体耦联PMNs膜表面MPO, Sytox orange(SO)核酸染料标记脱氧核糖核酸(DNA), 建立FCM检测全血NETosis相关标志物方法。7-氨基放线菌素D(7-AAD)染料观察溶血对细胞膜完整性的影响, 进行NETosis相关标志物(SO/MPO)的特异性检测。受试者工作特征(ROC)曲线分析NETosis相关标志物和白细胞总数(WBC)在SAC患者中的灵敏度和特异性, 用Mann-Witney统计量的非参数法估计ROC曲线下面积(AUC), AUC的比较采用配对设计的两相关诊断试验差异假设检验。结果全血分离的PMNs与FACS试剂溶血后的PMNs对7-AAD的阴性表达率比较, 两者差异无统计学意义[(95.1±6.6)%比(93.5±5.7)%, t=1.984, P>0.05]。NETosis相关标记物SO/MPO不能识别Etoposide药物诱导的PMNs凋亡(Apoptosis)。ROC曲线分析SAC患者的AUC, NETosis相关标记物取2.5%时的AUC高于WBC取8.0×109/L时的AUC(0.97比0.72, Z=2.011, P<0.05), 差异有统计学意义。结论 FCM检测外周全血PMNs上NETosis相关标志物具有良好的敏感性、特异性, 在SAC诊断中有重要临床价值。

• 单位
  苏州大学附属第二医院