成年小鼠骨细胞的分离鉴定及其成纤维细胞生长因子受体的表达

作者：唐玉彬; 苏楠; 温轩; 陈思宇; 杜晓兰; 陈林

来源：第三军医大学学报, 2015, 37(08): 718-722.

DOI：10.16016/j.1000-5404.201409146

• 骨细胞
• 细胞分离
• 成纤维细胞生长因子受体

目的建立稳定的成年小鼠骨细胞分离和鉴定方法,检测其标志性基因和成纤维细胞生长因子受体(fibroblast growth factor receptor,FGFR)表达。方法将3月龄C57小鼠的胫骨和股骨分离后剪除干骺端,冲去骨髓,切割成约1 mm碎片,用Ⅰ型胶原酶和EDTA溶液交替消化以获取骨细胞。分别通过形态观察、ALP染色、OC染色和E11/gp38染色鉴定骨细胞。qRT-PCR检测骨细胞标志性基因表达,并与骨细胞系IDG-SW3和MLO-Y4比较。检测FGFRs在骨细胞的表达。结果分离出的骨细胞呈多树突状或星状,并借突触彼此连接。ALP染色可见成骨细胞染色阳性,骨细胞染色阴性。OC染色成骨细胞和骨细胞均阳性,成纤维细胞阴性,而E11/gp38染色仅见骨细胞染色阳性。实验所得细胞表达骨细胞特异基因DMP1、SOST、FGF23,表明骨细胞成功分离,且此原代骨细胞与IDG-SW3和MLOY4细胞系表达有差异。FGFR13在骨细胞中均有表达。结论成功分离成年小鼠原代骨细胞,发现FGFR13在原代骨细胞中均有表达。

• 单位
  兰州军区兰州总医院; 创伤、烧伤与复合伤研究国家重点实验室