微小隐孢子虫甘油醛-3-磷酸脱氢酶的定位及活性检测

作者：邹贝贝; 王东强; 尹继刚; 朱冠^*

来源：寄生虫与医学昆虫学报, 2023, 30(03): 137-142.

• 微小隐孢子虫
• 糖酵解途径
• 甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)
• 酶活动力学
• 蛋白定位

本研究以微小隐孢子虫甘油醛-3-磷酸脱氢酶(Cryptosporidium parvum glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase, CpGAPDH)为对象，研究其亚细胞定位和酶动力学特征。设计特异性抗原多肽并免疫家兔，获得多克隆抗体，利用亲和纯化法获特异性抗体；经Western blot方法验证该抗体特异性，再通过间接免疫荧光法(IFA)进行蛋白定位。通过原核表达获得GST重组蛋白(GST-CpGAPDH),基于GAPDH的酶促反应利用辅酶NAD(H)或NADP(H)为电子受体或供体的原理，通过吸光度比色法监测反应中NAD(H)/NADP(H)的增加或减少鉴定其酶活性。结果显示，成功获得并纯化抗CpGAPDH抗体；Western blot分析显示该抗体可识别条带大小为40 kDa; IFA结果表明该蛋白主要分布于子孢子胞浆内，部分呈现颗粒状。利用重组蛋白确定了CpGAPDH的酶活性；在两种辅酶中，CpGAPDH更倾向于使用NAD(H)进行酶活反应。结果表明，本研究确定了CpGAPDH在虫体细胞的定位及酶活性检测，为进一步研究其生物学功能奠定了基础。

• 单位
  吉林大学