miR-32-5p通过调节Twist1抑制甲状腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭

作者：欧阳丽; 陈继东; 周赤; 贺春雪; 陈泉; 刘庆^*

来源：临床肿瘤学杂志, 2023, 28(09): 769-777.

• 甲状腺癌
• miR-32-5p
• Twist1
• 增殖
• 凋亡
• 迁移
• 侵袭

目的 探讨miR-32-5p在甲状腺癌组织中的表达及其对甲状腺癌细胞生物学行为的影响。方法 采用实时荧光定量PCR(qPCR)检测甲状腺癌组织和对应癌旁组织中miR-32-5p的表达水平，筛选miR-32-5p高表达的甲状腺癌细胞系TPC-1细胞和低表达的甲状腺癌细胞系KTC-1细胞。采用miR-32-5p inhibitor转染TPC-1细胞(inhibitor-miR-32-5p)和miR-32-5p mimics转染KTC-1细胞(mimics-miR-32-5p),另分别转染无关系列作为阴性对照(inhibitor-NC和mimics-NC)。使用平板克隆形成、CCK-8法检测各组细胞增殖能力，划痕实验、Transwell小室法检测各组细胞迁移、侵袭能力，流式细胞术检测各组细胞凋亡情况，Western blotting检测各组细胞上皮间质转化(EMT)相关蛋白的表达水平。采用荧光素酶报告基因测定Twist1与miR-32-5p的关系；利用转染法分别上调mimics-miR-32-5p-KTC-1细胞及沉默inhibitor-miR-32-5p-TPC-1细胞中Twist1的表达，并检测各组细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭能力和EMT相关蛋白的表达水平。结果 甲状腺癌组织中的miR-32-5p水平显著低于对应癌旁组织(P<0.05)。甲状腺癌细胞系中miR-32-5p的表达水平也显著低于正常HTORI-3细胞系，其中TPC-1细胞miR-32-5p表达水平最高，KTC-1细胞miR-32-5p表达水平最低。过表达miR-32-5p后KTC-1细胞96 h的增殖活性、克隆形成能力、细胞迁移及侵袭能力下降，细胞凋亡率上升(P<0.05),同时EMT标志物E-cadherin表达升高，N-cadherin、Fibronectin、Snail和Vimentin的表达水平下降(P<0.05)。敲低miR-32-5p后TPC-1细胞96 h的增殖活性、克隆形成能力、细胞迁移及侵袭能力升高，细胞凋亡率下降(P<0.05),同时EMT标志物E-cadherin表达下降，N-cadherin、Fibronectin、Snail和Vimentin的表达水平上升(P<0.05)。miR-32-5p可抑制野生型Twist1-3′-UTR的荧光素酶活性(P<0.05),而对突变型Twist1-3′-UTR的荧光素酶活性无影响(P>0.05)。通过RNA干扰Twist1后功能学实验验证发现，上调Twist1后可回复miR-32-5p过表达对细胞增殖、凋亡、迁移及侵袭能力的抑制，沉默Twist1后可回复miR-32-5p低表达对细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭能力的增强。Western blotting检测结果显示，上调或下调Twist1均可回复miR-32-5p对EMT过程的调控作用。结论 miR-32-5p通过靶向Twist1在甲状腺癌中作为肿瘤抑制因子抑制甲状腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭。

• 单位
  湖北省中医院