苹果砧木山定子MbNas1的克隆、表达与亚细胞定位

作者：杨国慧; 石岩; 吕冰玉; 王冰; 于洋; 韩德果

来源：湖北农业科学, 2015, 54(09): 2260-2263.

DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2015.09.058

• 山定子(Malus baccata)
• 尼克烟酰胺合成酶基因(Mb Nas1)
• 表达分析
• 亚细胞定位

以苹果砧木山定子(Malus baccata)为试材,根据小金海棠(Malus xiaojinensis Cheng et Jiang)中克隆得到的尼克烟酰胺合成酶基因Mx Nas1(登录号:DQ403256)的全长序列设计特异引物,通过RT-PCR方法从山定子c DNA中克隆到Nas1基因并命名为Mb Nas1,该基因全长为978 bp。预测该基因可编码325个氨基酸,理论等电点为5.26,相对分子质量为36.09 ku。Real-time PCR结果表明,正常供铁(EDTA-Na Fe,40μmol/L)时,该基因在山定子水培苗的新叶、老叶、根、茎的韧皮部中均有表达,在木质部表达量较低;缺铁处理(4μmol/L)时,该基因在根和新叶中的表达加强,第6天达到最高值,之后开始下降;在老叶中表达逐渐减弱;高铁处理(160μmol/L)时,该基因在根和新叶中的表达减弱,在第9天达到最小值,之后有所上升;在老叶中表达逐渐增强。基因枪亚细胞定位试验表明,Mb Nas1蛋白质定位在细胞质膜上。

• 单位
  东北农业大学; 农业部