利用CRISPR-Cas9编辑蒺藜苜蓿串联重复基因

作者：李宇赫; 裴悦; 沈怡彤; 张锐; 王宜宜; 王劭学; 姚莉琦; 李力涵; 康明明; 李登耀; 陈玉辉^*

来源：草业科学, 2022, 39(10): 2102-2111.

• CRISPR-Cas9
• 蒺藜苜蓿
• 串联重复基因
• DWF7
• 基因编辑
• 毛根转化
• 油菜素甾醇

DWF7基因编码Δ7甾醇C5去饱和酶，参与植物油菜素甾醇的合成。在豆科模式植物蒺藜苜蓿(Medicago truncatula)中，MtDWF7基因位于6号染色体，具有3个串联重复的拷贝。本研究利用CRISPR-Cas9技术，针对蒺藜苜蓿DWF7基因的3个拷贝，通过序列比对在3个基因外显子的同源区段设计两个编辑靶点，构建基因表达载体，转化野生型蒺藜苜蓿并产生毛根，提取转基因毛根DNA进行检测。经PCR鉴定，35份转基因毛根DNA样品中，靶位点1对3个基因的编辑效率分别为44.43%、5.71%和34.29%,3个基因在靶位点1同时发生编辑的概率为5.71%，而靶位点2未检测到基因编辑。本研究在毛根中实现了对MtDWF7串联重复的3个基因的同时编辑，证明选择合适的靶点可同时编辑3个基因，为串联重复基因功能的研究提供了新的思路。

• 单位
  兰州大学; 生命科学学院