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摘要
目的建立一种高通量的甲硫氨酸亚砜还原酶A(MsrA)活性筛选体系,为后续的定向进化改造等研究提供快速的活性检测方法。方法随机挑取含pmMsrA重组表达质粒的基因工程菌单克隆,在96孔培养板中培养并表达重组蛋白。利用溶菌酶破碎含MsrA重组蛋白的基因工程菌,利用DTNB-DTT显色法,测定样品反应液在412 nm处的光吸收减少值,来衡量MsrA酶蛋白的相对活性。结果 MsrA蛋白在96孔培养板中成功获得了具有生物学活性的重组表达,通过DTNB-DTT显色法活性测定,每个培养孔中表达的重组蛋白的生物学活性均几乎一致,差异系数仅为9.1%。结论成功建立了MsrA高通量活性检测体系,可用于MsrA活性的大量筛选。
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