组蛋白去乙酰化酶抑制剂tubastatin A促进嗜肺军团菌感染RAW264.7细胞自噬的机制

作者：杨晓辰; 曹秀琴; 盛琳琳; 杨志伟^*

来源：细胞与分子免疫学杂志, 2021, 37(08): 693-701.

DOI：10.13423/j.cnki.cjcmi.009205

• 嗜肺军团菌
• 组蛋白去乙酰化酶6(HDAC6)
• Tubastatin A (TubA)

目的探讨组蛋白去乙酰化酶6(HDAC6)在嗜肺军团菌干扰巨噬细胞自噬中的作用及机制。方法采用(10、 5、 2.5)μmol/L tubastatin A (TubA)处理RAW264.7巨噬细胞,CCK-8法检测RAW264.7巨噬细胞的增殖活性确定TubA的半数抑制浓度(IC50)。建立嗜肺军团菌感染RAW264.7巨噬细胞感染模型,实验分为无TubA组(每组设细胞对照组、灭活菌组、活菌组),(10、 5、 2.5)μmol/L TubA处理组(每组均设细胞对照组、灭活菌组、活菌组)。嗜肺军团菌感染6、 12、 24、 48 h,收集各组细胞。细菌增殖实验检测嗜肺军团菌在RAW264.7巨噬细胞内增殖的情况;pmCherry-C1-EGFP-LC3B质粒转染RAW264.7小鼠巨噬细胞检测各组内自噬流变化;实时定量PCR和Western blot法检测组蛋白去乙酰化酶6(HDAC6)、 P62、微管相关蛋白1轻链3(LC3)、α微管蛋白(α-tubulin)、含缬酪肽蛋白(p97/VCP)、热休克蛋白90(HSP90)、 HSP70、热休克转录因子1(HSF1)和纤维型肌动蛋白(F-actin)的mRNA及蛋白表达水平。结果 TubA的IC50为50μmol/L。与RAW264.7细胞正常对照组相比,加入TubA后,嗜肺军团菌在小鼠巨噬细胞内增殖明显减少。在无HDAC6抑制剂组中,与正常对照组相比,活菌组比灭活菌组对自噬流的抑制作用更强。在HDAC6抑制剂TubA组中,活菌组的绿色荧光亮点均减少,自噬流增加。嗜肺军团菌的灭活菌和活菌分别作用于RAW264.7巨噬细胞6、 12、 24、 48 h,与正常对照RAW264.7细胞相比,TubA嗜肺军团菌干扰组HDAC6、α-tubulin、 p97/VCP、 P62 mRNA和蛋白表达均降低。结论嗜肺军团菌干扰RAW264.7巨噬细胞自噬与HDAC6/P62/LC3B和HDAC6/p97/HSF1信号通路有关。

• 单位
  宁夏医科大学; 基础医学院