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摘要
目的探讨京尼平-壳聚糖牦牛跟腱胶原蛋白支架的构建及其细胞毒性和组织相容性。方法以牦牛跟腱为材料,用酶-酸法进行粗提,结合高效液相色谱进行胶原蛋白的分离、纯化,加入交联剂构建京尼平-壳聚糖牦牛跟腱胶原蛋白支架及京尼平-壳聚糖标准I型胶原蛋白支架。将L929小鼠胚胎成纤维细胞接种于浇注2种支架的孔板上,分别培养1、3、5、7、9、11 d,倒置显微镜下观察细胞形态,细胞计数试剂盒-8进行细胞增殖/毒性实验,计算细胞活力。将2种蛋白支架材料分别移植于同一只大鼠脊柱2侧深筋膜层,分别于移植后3、5、7、9 d取材,10%中性福尔马林液固定,石蜡包埋、切片,苏木精-伊红染色,显微镜下观察胶原降解情况,血管长入情况。数据比较采用t检验。结果培养1、3、5、7、9、11 d,接种于浇注京尼平-壳聚糖牦牛跟腱胶原蛋白支架与京尼平-壳聚糖标准I型胶原蛋白支架的孔板的L929小鼠胚胎成纤维细胞细胞活力分别为(3.14±0.04)%、(2.17±0.13)%、(2.60±0.11)%、(1.78±0.02)%、(1.64±0.32)%、(1.12±0.02)%,(2.96±0.07)%、(2.08±0.10)%、(2.68±0.14)%、(1.75±0.02)%、(1.84±0.01)%、(1.14±0.01)%,比较差异均无统计学意义(t=-2.15、-1.31、1.22、-1.27、1.51、0.54,P=0.06、0.22、0.25、0.25、0.16、0.63)。活体组织相容性实验,大鼠全部存活,手术切口愈合良好,未见急性炎症和局部积液、积脓改变。移植3、5、7、9 d取材,京尼平-壳聚糖牦牛跟腱胶原蛋白支架和京尼平-壳聚糖标准I型胶原蛋白支架均仍未降解,局部组织长入经交联的支架中,支架内见炎性细胞增殖,出现血红细胞及新生小血管。结论京尼平-壳聚糖牦牛跟腱胶原蛋白支架生物安全性良好,具有作为组织工程支架的潜力。
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