摘要

目的:探讨微小RNA(miRNA)在右归丸对激素型肾阳虚证肾组织与正常肾组织中的表达差异,并用生物信息学方法分析其意义,为右归丸干预肾阳虚证的进一步机制研究奠定基础。方法:15只SD大鼠随机分为正常组(5只)和造模组(10只),正常组注射2ml生理盐水,造模组后肢肌注氢化可的松注射液。成模后将造模组随机分为模型组和右归丸组,每组5只。右归丸组给予右归丸汤剂灌胃,模型组和正常组给予生理盐水灌胃。麻醉处死后使用TRIzol法提取肾组织中RNA,使用NanoDrop ND-1000对总RNA进行质量检测,用标记后的RNA与Agilent Rat 8 x 60k miRNA芯片进行杂交。收集原始数据进行标准化处理,进行聚类分析和火山图分析。利用生物信息学方法,预测差异miRNA富集的基因本体论(GO)功能和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路。结果:筛选出右归丸干预肾阳虚证相关差异表达miRNA 18条(∣log2FC∣≥1.5,P≤0.05),其中包括5条上调miRNA,分别是rno-miR-149-3p、rno-miR-188-5p、rno-miR-221-5p、rno-miR-762、rno-miR-877;13条下调miRNA,分别是rno-miR-101b-5p、rno-miR-125a-3p、rno-miR-125b-2-3p、rno-miR-3085、rno-miR-344a-5p、rno-miR-347、rno-miR-34b-3p、rno-miR-351-3p、rno-miR-3573-3、rno-miR-370-3p、rno-miR-409a-3p、rno-miR-448-3p、rno-miR-503-3p。GO分析显示,差异表达miRNA主要参与DNA、RNA转录的正调控的进程中且与ATP的结合显著相关。KEGG分析显示,差异表达miRNA显著富集于cAMP通路和FoxO信号通路,这两条通路与线粒体功能密切相关。结论:右归丸通过干预miRNA的表达,改善肾阳虚证大鼠线粒体功能,调节能量代谢异常,进一步为右归丸干预肾阳虚证的机制研究提供理论依据。