HIF-1α在奶牛胎盘滋养层细胞迁移及侵袭变化中的机制研究

作者：苏月; 郭勇; 高玉平; 肖龙菲; 廖晨星; 齐晓龙; 盛熙晖; 邢凯; 王相国^*; 倪和民^*

来源：华北农学报, 2023, 38(01): 202-209.

• 奶牛
• 滋养层细胞
• 缺氧
• 迁移
• 侵袭
• HIF-1α

为探究HIF-1α在CoCl2影响奶牛胎盘滋养层细胞迁移及侵袭变化中的作用，揭示奶牛胎盘在缺氧条件下的形成机制，从早期妊娠奶牛胎盘中分离纯化奶牛胎盘滋养层细胞(BTCs),用吉姆萨染色法观察细胞形态，免疫荧光法检测上皮细胞标志蛋白角蛋白7(CK7)、Thy/CD90蛋白表达，后将pCI-neo-hTERT质粒转染至BTCs,用qPCR和Western Blot法检测细胞TERT mRNA及蛋白表达，用CCK8法测定细胞增殖率，用ELISA法检测细胞分泌胎盘催乳素(PL)的能力，进一步利用siRNA沉默细胞缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)的表达，ELISA法检测细胞分泌血管内皮生长因子(VEGFA)能力，通过划痕试验及Transwell检测细胞迁移及侵袭能力。结果显示，分离纯化的BTCs为典型上皮样细胞，存在一定数量的双核细胞，并表达上皮细胞标志蛋白CK7,未见Thy/CD90表达，转染后的细胞可稳定表达端粒酶(TERT)mRNA及蛋白，连续传代50代未见细胞老化现象，且增殖率显著高于原代BTCs(P<0.05),分泌PL能力较原代BTCs无显著差异(P>0.05)。经CoCl2处理后发现，BTCs细胞活力随CoCl2处理浓度及时间的增加而降低，HIF-1α mRNA及蛋白表达随CoCl2浓度的增加而减少(P<0.05),400μmol/L CoCl2作用于BTCs 24 h建立缺氧模型，VEGFA分泌和迁移侵袭能力在BTCs缺氧状态下显著升高(P<0.05),而将HIF-1α基因沉默后显著降低了BTCs分泌VEGFA和迁移侵袭能力(P<0.05)。总之，通过外源性TERT基因转导建立了永生化的BTCs(Bovine trophoblast cells),永生化后的细胞具有与原代细胞相似的生物学特性，BTCs在缺氧条件下具有更强的VEGFA分泌能力及迁移侵袭能力，且与HIF-1α基因表达的上调有关。

• 单位
  北京农学院