猪Nhlh2基因启动子活性及其表达调控的初步研究

作者：温丽娟; 刘发伟; 林长光; 陈子韬; 张哲; 张豪; 李加琪; 袁晓龙

来源：畜牧兽医学报, 2018, 49(04): 667-674.

• 猪
• Nhlh2基因
• 启动子活性
• 转录调控元件

旨在研究母猪Nhlh2基因启动子活性及其与转录因子之间的调控关系,为探索该基因的表达调控提供分子水平的依据,也为研究母猪繁殖机制提供一定的参考。本研究以猪卵巢组织DNA为模板,PCR扩增Nhlh2不同长度的启动子缺失片段,克隆到pGL3-basic载体构建启动子报告基因重组质粒,并将其转染到猪卵巢颗粒细胞,测定相对双荧光素酶活性值;通过染色质免疫共沉淀技术(ChIP),研究Nhlh2启动子与YY1、C/EBPβ蛋白之间的相互作用;随后构建转录因子超表达、突变载体和小干扰RNA(siRNA),利用双荧光素酶检测系统进行活性验证。经双荧光素酶报告系统检测发现,Nhlh2基因的P7(-238+129)区域启动子转录活性最高,-654-238片段范围可能存在负调控元件,-238-20区域可能存在正调控元件;通过生物信息学分析和ChIP验证,Nhlh2启动子区-101-85和-153-140区域分别是转录因子YY1和C/EBPβ的结合位点;突变YY1和C/EBPβ的结合位点后,P7的双荧光活性显著上调;超表达YY1和C/EBPβ后,P7的双荧光活性显著下调;干扰YY1和C/EBPβ的表达后,P7的双荧光活性显著上调。本研究确定了猪Nhlh2基因的核心启动子区域为-238+129,YY1和C/EBPβ分别结合在Nhlh2基因启动子区的-101-85和-153-140区域,抑制猪Nhlh2基因的转录活性。

• 单位
  福建光华百斯特生态农牧发展有限公司; 华南农业大学