两种分离纯化介质对虾肝肠胞虫孢子发芽率的影响

作者：杨小娟; 陈洁; 魏春梅; 范晓东^*; 周泽扬

来源：重庆师范大学学报(自然科学版), 2020, 37(03): 46-146.

• 虾肝肠胞虫
• 密度梯度离心
• 蔗糖
• Percoll
• 发芽

【目的】比较蔗糖和Percoll两种不同介质的密度梯度离心分离纯化虾肝肠胞虫(Enterocytozoon hepatopenaei,EHP)孢子的效果及对EHP孢子发芽活力的影响。【方法】取感染EHP的凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)肝胰腺充分研磨,经3次差速离心后,设置介质质量分数为30%,60%,90%的梯度,分别进行蔗糖和Percoll密度梯度离心,比较两种介质不同分层中EHP孢子的数量和纯化效果。纯化样品分别用0.1mol·L-1的KOH溶液、0.15mol·L-1的HCl溶液、0.15mol·L-1的NaOH溶液、0.025mol·L-1 pH为11.5的磷酸盐缓冲液、0.05mol·L-1 pH为8.8的TrisHCl溶液、0.01mol·L-1 pH为4.8的柠檬酸盐缓冲液等6种溶液于28℃孵育30min,比较EHP孢子的发芽率。【结果】蔗糖密度梯度离心后EHP孢子主要分布在蔗糖质量分数为90%层的底层,数量为1.53×108个。Percoll密度梯度离心后EHP孢子主要分布在Percoll质量分数为90%层的下层,数量为2.64×107个。经Percoll或蔗糖密度梯度离心分离纯化的EHP孢子再经上述6种不同溶液处理后,孢子发芽率存在差异;经0.1mol·L-1的KOH溶液或0.05mol·L-1pH为8.8的Tris-HCl溶液诱导时,两种介质分离纯化所得的EHP孢子发芽率之间差异具有统计学意义(p<0.05)。【结论】以介质质量分数为30%,60%,90%的梯度对EHP孢子进行密度梯度离心,蔗糖的分离纯化效果比Percoll更好,对EHP孢子的发芽率影响更小;经蔗糖或Percoll分离纯化的EHP孢子再经0.05mol·L-1 pH为8.8的Tris-HCl溶液或0.025mol·L-1 pH为11.5的磷酸盐缓冲液处理,可获得较高的发芽率。

• 单位
  生命科学学院; 家蚕基因组生物学国家重点实验室; 重庆师范大学