摘要
低温是制约烟叶生产的重要因素,挖掘烟草(Nicotiana tabacum L.)耐低温基因对烟草耐低温品种改良具有重要意义。ICE-CBF-COR (Inducer of CBF expression-C-repeat binding factor-Cold-responsive genes)通路在植物响应低温信号传导途径中发挥着关键作用,然而关于烟草CBF基因功能的研究尚没有报道。前期我们发现NtCBF7受冷诱导表达,其基因功能尚不明确。本研究利用基因编辑技术获得了NtCBF7的两个突变体Ntcbf7-1和Ntcbf7-2。序列分析表明Ntcbf7-1和Ntcbf7-2分别在第208位碱基处出现一个碱基的插入和缺失,两类突变最终均导致NtCBF7基因转录提前终止。耐低温鉴定结果表明,在低温(4 ℃)处理1和4 h后,Ntcbf7-1和Ntcbf7-2的叶片萎蔫程度均高于对照‘K326’,说明NtCBF7正向调控烟草低温耐受性。生理生化测定数据表明,在低温(4 ℃)处理1和4 h后,Ntcbf7-1和Ntcbf7-2的过氧化氢(H_(2)O_(2))和超氧阴离子(O_(2)~(-))的含量以及超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)和过氧化物酶(peroxidase, POD)活性均显著高于‘K326’。在低温(4 ℃)处理1和4 h后,Ntcbf7-1和Ntcbf7-2的脯氨酸(proline, PRO)含量显著低于‘K326’,丙二醛(malondialdehyde, MDA)含量仅在低温处理1 h后显著高于‘K326’。综上,NtCBF7通过影响活性氧(reactive oxygen species, ROS)、PRO和MDA含量,SOD和POD活性提高烟草低温耐性。
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