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摘要
目的：基于超高效液相色谱-四极杆-飞行时间串联质谱法(UPLC-Q-TOF-MS)、多元统计分析和网络药理学方法确定生、醋柴胡抗抑郁作用的质量标志物及其作用机制。方法：通过UPLC-Q-TOF-MS获得生、醋柴胡饮片的化学物质基础，采用主成分分析(PCA)和正交偏最小二乘判别分析(OPLS-DA)筛选柴胡醋制前后发生显著变化的差异成分作为候选Q-Marker，运用网络药理学方法构建柴胡抗抑郁的“疾病-药物-成分-靶点”网络，按通路所涉及的靶点数筛选目标信号通路，再通过药效学、实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)、蛋白免疫印迹(Western Blot)进行验证，确定生、醋柴胡抗抑郁Q-Marker。结果：从生、醋柴胡饮片质谱总离子流图中鉴定得到29个化学成分，其中有18种成分在醋制前后发生明显变化，通过S-Plot差异标志物筛选确定柴胡皂苷A、B1、B2、C、D等9种成分为柴胡饮片的候选Q-Marker；从29个化学成分中去掉与抑郁症蛋白靶点不存在交集的10个成分，构建以剩余19个成分及其靶点为基础的“疾病-药物-成分-靶点”网络。造模21天后，与空白组比较，模型组、阳性组和柴胡皂苷组大鼠的体质量、糖水偏好指数及旷场实验总分均显著增加(P<0.01)；给药28天后，与模型组比较，柴胡皂苷组大鼠的体质量、糖水偏好指数及旷场实验总分均显著增加(P<0.01)；与模型组比较，柴胡皂苷组大鼠海马磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、蛋白激酶B(Akt)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、β-连环蛋白(β-catenin)mRNA表达明显增加(P<0.05)，糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)、叉头框转录因子O3a(FoxO3a)mRNA表达明显减少(P<0.05)，Akt蛋白表达显著增加(P<0.01)，PI3K和FoxO3a的蛋白表达显著减少(P<0.01)。结合Q-Marker的可测性和溯源性，确定柴胡皂苷A、B1、B2、C、D为生、醋柴胡抗抑郁的Q-Marker。结论：柴胡醋制前后的化学成分发生较大变化，经物质基础、药效学、网络药理学及信号通路研究确定生、醋柴胡抗抑郁Q-Marker，为柴胡饮片质量控制、药效物质基础及“炮制增效”机制的进一步研究提供参考。
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