河弧菌AL536＿RS29525基因功能研究

作者：张安冉; 刘笑舒; 黄元铭; 韩雨; 刘平; 李杰; 阚飙; 梁未丽^*

来源：疾病监测, 2021, 36(05): 481-488.

• 河弧菌
• Ⅵ型分泌系统
• AL536＿RS29525
• Hcp
• 表达调控

目的探讨河弧菌基因组中VflT6SS2核心基因簇上游paar基因簇中AL536RS29525的序列特征、对VflT6SS2分泌功能和杀菌活性的影响以及可能的调控机制。方法利用Muscle、GeneDoc软件进行AL536RS29525基因编码产物的序列特征分析;同源重组技术构建AL536RS29525的缺失株,PCR扩增AL536RS29525编码序列克隆于p SRKTc获得回补质粒p SR-29525,继而导入ΔAL536RS29525得到回补株;Western Blot (WB)检测相应菌株中VflT6SS2 Hcp蛋白的表达和分泌,以大肠埃希菌为prey的细菌竞争/杀菌实验检测VflT6SS2介导的菌株杀菌能力;基于Lux报告基因的启动子融合系统冷光检测确定AL536RS29525缺失对VflT6SS2核心基因簇启动子和hcp启动子活性的影响;荧光定量反转录聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测hcp (tssD2)和vipA (tssB2) mRNA的相对表达水平。结果 AL536RS29525同源基因编码蛋白的结构和功能较为保守;缺失AL536RS29525负性影响VflT6SS2 Hcp蛋白的表达及分泌,降低VflT6SS2介导的菌株杀菌能力,回补AL536RS29525可恢复缺失株Hcp的表达、分泌和杀菌能力;缺失株ΔAL536RS29525中hcp (tssD2)和vipA (tssB2)的mRNA表达量均低于野生株;而VflT6SS2的核心基因簇启动子和hcp启动子活性在ΔAL536RS29525缺失株和野生株之间无显著差异。结论河弧菌AL536RS29525基因较为保守,与霍乱弧菌以及弗尼斯弧菌的同源基因均具有较高的同源性。AL536RS29525基因是河弧菌VflT6SS2的重要组成部分,为其Hcp效应子的正常表达、分泌功能以及VflT6SS2介导的杀菌活性所必需。AL536RS29525可能转录后水平影响VflT6SS2的功能表达。

• 单位
  中国疾病预防控制中心传染病预防控制所