CRISPR/Cas9结合loxP-Cre技术制备肝特异性G6PC基因缺陷小鼠的实验研究

作者：王薇; 宋红梅; 张胜海; 刘铭; 张长青; 邱正庆^*

来源：北京医学, 2020, 42(11): 1127-1131.

DOI：10.15932/j.0253-9713.2020.11.021

• 糖原累积症Ia型
• 肝特异性G6PC基因敲除
• 小鼠模型
• CRISPR/Cas9
• loxP-Cre

目的建立肝特异性G6PC基因纯合缺陷的Ia型糖原累积症(glycogen storage disease Ia, GSD Ia)小鼠模型。方法通过CRISPR/Cas9基因重组技术使C57BL/6J小鼠受精卵中G6PC基因外显子2两侧分别插入1个loxP原件,产仔后经鉴定打靶成功的小鼠通过扩繁、兄妹交配及与Alb-Cre小鼠交配,最终产生G6PC-loxP+/+、Alb-Cre共表达的肝特异性G6PC基因2号外显子纯合敲除的GSD Ia小鼠模型。通过监测模型鼠及背景鼠的餐后0～12 h的血糖来验证模型是否成功。结果经PCR鉴定F0及F1代小鼠成功于G6PC基因2号外显子两侧插入loxP原件并可稳定遗传;最终成功建立G6PC-loxP+/+、Alb-Cre共表达的GSD Ia小鼠,检测餐后1～12 h血糖均低于背景鼠,说明造模成功。结论应用CRISPR/Cas9基因重组技术及loxP-Cre系统可建立肝特异性G6PC基因缺陷的GSD Ia小鼠,可用于该病的病理研究及药物研发。

• 单位
  北京科信必成医药科技发展有限公司; 中国医学科学院北京协和医学院; 北京协和医院