水牛NLRP5基因原核表达载体构建及多克隆抗体制备

作者：陈东荣; 肖凯; 段林伟; 张明^*

来源：黑龙江动物繁殖, 2020, 28(04): 1-6.

DOI：10.19848/j.cnki.ISSN1005-2739.2020.05.1003

• 水牛
• NLRP5基因
• 原核表达
• 多克隆抗体

为了制备水牛母源基因NLRP5多克隆抗体,采用PCR扩增水牛NLRP5基因并利用原核表达技术构建NLRP5表达载体,转化感受态细胞BL21,通过IPTG诱导表达,纯化后的重组蛋白用于免疫小鼠,制备鼠抗NLRP5多克隆抗体,用Western blot分析该基因在水牛各组织的表达特性。结果表明:通过PCR扩增成功克隆了水牛NLRP5基因CDS序列3 297 bp和原核表达的480 bp目的片段,成功构建了原核表达载体p ET32a-NLRP5。在诱导最佳条件(0.5 mmol/L IPTG,30℃诱导10 h)下NLRP5重组蛋白以包涵体形式表达,纯化复性后重组蛋白能和His标签特异性反应。用该重组蛋白免疫制备获取的鼠抗NLRP5多克隆抗体与NLRP5重组蛋白反应,效价达1∶64 000。用制备的多克隆抗体验证NLRP5蛋白,仅在水牛卵母细胞中特异性表达,其他组织中均无表达。

• 单位
  亚热带农业生物资源保护与利用国家重点实验室; 广西大学