可诱导表达AML1-ETO白血病细胞模型的建立及其对白血病细胞脂肪酸代谢的影响

作者：谢婉清; 杨雪; 顾闰夏; 田征; 邢海燕; 唐克晶; 饶青; 邱少伟; 王敏; 王建祥^*

来源：中华血液学杂志, 2023, 44(05): 366-372.

DOI：10.3760/cma.j.issn.0253-2727.2023.05.003

• 白血病, 髓系, 急性
• AML1-ETO融合基因
• U937细胞
• Tet-on系统
• 脂肪酸代谢

目的通过建立可诱导表达AML1-ETO(AE)融合基因的白血病细胞模型, 研究AE融合基因对U937白血病细胞生物学功能的影响。方法利用慢病毒载体系统, 构建强力霉素(Dox)依赖的可诱导表达AE融合基因的U937细胞系(U937-AE)。在AE融合基因表达前后, 分别采用CCK-8法、流式细胞术进行细胞增殖、周期、诱导分化检测, 并进行转录组学测序和代谢组学测序分析, 初步探讨AE融合基因对白血病细胞生物学功能的影响。结果①成功构建Dox依赖的Tet-on调控系统, 调控AE融合基因在U937-AE细胞中稳定表达。②诱导AE融合基因表达24 h后, 表达AE的U937-AE细胞增殖倍率为3.47±0.07, 低于AE阴性组的3.86±0.05(P<0.05);处于G0/G1期的细胞比例为(63.45±3.10)%, 明显高于AE阴性组的(41.36±9.56)%(P<0.05);表达CD13、CD14的细胞比例较AE阴性组明显下降(P<0.05)。③转录组学测序进行基因集富集分析显示, 与静息相关、NF-κB和干扰素α/γ应答相关的炎症反应和免疫调节的基因集被明显富集在表达AE的U937-AE细胞。④U937-AE细胞表达AE融合基因后脂肪酸代谢发生紊乱, AE阳性组细胞的部分中、短链脂肪酸酰基肉碱的代谢物浓度降低[丙酰基-L-肉碱:AE阳性组0.46±0.13, AE阴性组1.00±0.27(P<0.05)];部分长链脂肪酸酰基肉碱的代谢物浓度升高[十四烷酰肉碱:AE阳性组1.26±0.01, AE阴性组1.00±0.05(P<0.05)]。结论成功建立可诱导表达AE融合基因的白血病细胞模型。AE融合基因表达使U937-AE细胞增殖变慢、周期阻滞、分化受抑, 炎症反应和免疫调节的相关基因集被明显富集, 细胞的脂肪酸代谢发生紊乱。

• 单位
  中国医学科学院血液病医院; 实验血液学国家重点实验室; 中国医学科学院血液学研究所