重型α-地中海贫血胎儿羊水源诱导多能干细胞的建立及鉴定

作者：张娟; 赖春田; 王海燕; 邹闻达; 彭娟; 朱力宇; 李辉^*

来源：中国医药导报, 2019, 16(27): 18-189.

• 重型α-地中海贫血
• 羊水细胞
• 诱导多能干细胞
• 仙台病毒

目的探讨重型α-地中海贫血胎儿羊水源诱导多能干细胞的建立及鉴定。方法对胎儿被诊断为重型α-地中海贫血(--SEA/--SEA)的孕妇(16+周)进行超声引导下羊膜腔穿刺术,抽取10 mL羊水。利用非整合型仙台病毒介导Sox2、Klf4、c-Myc、Oct 3/4四种转录因子将重型α-地中海贫血胎儿的羊水细胞重编程为诱导性多能干细胞(iPSCs);通过碱性磷酸酶(ALP)染色,免疫荧光标记(IF)检测等对iPSCs进行多能性鉴定;通过拟胚体(EB)的形成和自发分化实验对i PSCs在体内外3个胚层细胞分化的能力进行鉴定;同时进行细胞核型分析及缺失型α-地中海贫血基因诊断。结果仙台病毒可以成功地将重型α-地中海贫血胎儿的羊水细胞重新编程为非整合型诱导性多能干细胞(h-AF-SeV-iPSCs);ALP染色呈强阳性;IF检测显示Sox2、Oct4、SSEA-4、Tra-1-81表面特异性蛋白表达为阳性;h-AF-SeV-iPSCs悬浮培养均能形成囊性EB,贴壁培养后3个胚层均能分化;h-AF-SeV-iPSCs第10代及第20代细胞染色体核型均为正常核型(46,XY);且h-AF-SeV-iPSCs及其原代羊水细胞的重型α-地贫基因检测均为--SEA/--SEA缺失型。结论 h-AF-SeV-iPSCs可作为研究重型α-地中海贫血胎儿宫内治疗的理想细胞模型,羊水细胞可作为i PSCs的理想细胞来源。

• 单位
  株洲市中心医院