新生大鼠海马神经元体外氧-糖剥夺再灌注模型的建立

作者：郭慧; 俞丹; 周晖; 童煜; 陶于洪

来源：中华妇幼临床医学杂志(电子版), 2016, 12(03): 286-290.

• 海马神经元
• 原代培养
• 缺血缺氧,脑
• 氧-糖剥夺再灌注
• 三气培养箱
• 体外
• 大鼠

目的体外培养新生大鼠海马神经元,建立神经元氧-糖剥夺再灌注(OGD/R)模型,为临床进一步研究新生儿缺氧缺血性脑损伤奠定基础。方法以L-多聚赖氨酸和鼠尾胶原作为海马神经元体外培养的生长基质,分离24h内新生SD大鼠海马,胰蛋白酶水浴振荡消化获得单个细胞,采用Neurobasal维持培养基更继续培养。培养7d后将神经元细胞培养基更换为无糖缺血液,置于95%高纯度氮气(N2)三气培养箱内缺氧处理2h。将其取出更换为正常培养基继续培养24h,构建神经元OGD/R模型。然后,采用抗微管相关蛋白2-5-异硫氰酸荧光素(anti-MAP2-FITC)标记神经元,于荧光显微镜下观察建模前与建模后神经元的形态学改变,采用细胞活性检测试剂盒(CCK-8)检测微管相关蛋白(MAP)2阳性细胞存活率,对OGD/R模型进行评价。结果荧光显微镜下观察到正常情况下神经元细胞形态结构完整,树突及轴突舒展,交织成网状。建模后,神经元突触回缩,细胞崩解,网状结构被破坏。CCK-8检测结果显示,建模后神经元细胞存活率降低。结论此方法体外培养神经元细胞纯度在95%以上;使用无糖神经元细胞缺血液联合高纯度N2培养2h,再更换为正常培养基培养的方法,可成功建立神经元细胞的OGD/R模型。

• 单位
  四川大学华西第二医院