p53在环磷酰胺代谢物丙烯醛致未成熟睾丸支持细胞凋亡中的作用

作者：邓常开; 刘丰; 李旭良; 林涛; 何大维; 魏光辉; 刘星; 华燚; 张德迎; 吴胜德

来源：中华小儿外科杂志, 2016, 37(08): 621-626.

DOI：10.3760/cma.j.issn.0253-3006.2016.08.014

• 塞尔托利细胞
• 环磷酰胺
• 丙烯醛
• 肿瘤抑制蛋白质p53
• 细胞凋亡

目的探讨p53在环磷酰胺(CP)代谢产物丙烯醛(ACR)导致未成熟睾丸支持细胞线粒体功能紊乱、细胞凋亡中的作用及机制。方法建立未成熟SD大鼠支持细胞原代培养模型,实验组给予100μmol/L浓度的ACR溶液,对照组给予PBS溶液。ACR处理后10min、30min及1 h时用原位免疫荧光检测p53的迁移定位,并在ACR处理1 h、3 h和12 h后分别做如下处理:①Western blot检测细胞内p53及Bax的表达;②细胞行JC-1染色,流式细胞仪检测线粒体膜电位的变化;③流式细胞仪检测细胞凋亡情况。结果①支持细胞分离培养成功,见细胞贴壁生长,长梭形,23个突起;②在ACR处理10 min时线粒体中可见少许p53分布,30 min时线粒体中p53蛋白明显增加,之后维持在这一水平未见明显增加;③ACR处理1 h后,细胞内的p53和Bax的表达均明显高于对照组(P<0.05);ACR处理3 h后细胞内p53的表达明显高于对照组(P<0.05),但与12 h组比较未见明显差异(P>0.05);而3 h后Bax的表达明显高于对照组(P<0.05),并随时间延长表达明显增多;④ACR处理1 h后,实验组线粒体膜电位为(87.43±0.76)%,与对照组(98.07±0.67)%相比,下降了约11%;处理3 h后,线粒体膜电位为(72.0±1.73)%,与对照组相比下降约26%;在处理12h后,线粒体膜电位为(51.53±1.93)%,与对照组相比下降约47%。提示线粒体功能受损;⑤ACR处理细胞1h、3 h及12 h后,细胞凋亡率分别为:(3.25±0.18)%、(8.74±0.64)%及(36.87±0.61)%。与对照组凋亡率(0.43±0.13)%比较,差异有统计学意义(P<0.05)。实验组不同时间点之间凋亡率比较也有统计学意义(P<0.05)。结论 CP及其代谢产物ACR可能通过激活.1p53信号网络,损害细胞线粒体功能,激活内源性细胞凋亡途径及非转录凋亡途径,导致支持细胞凋亡。这为我们进一步探讨CP生殖毒性机制以及研究更有效的保护策略提供了新的思路和实验依据。

• 单位
  成都市妇女儿童中心医院; 重庆医科大学附属儿童医院