含有CRISPR序列的噬菌体耐受菌的筛选

作者：滑玉会; 黄勇; 张志毅; 安小平; 米志强; 尹秀云; 陈建魁; 童贻刚

来源：安徽医科大学学报, 2014, 49(06): 833-836.

DOI：10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2014.06.032

• CRISPR系统
• 大肠埃希菌
• 噬菌体
• 噬菌体耐受

人工设计合成规律成簇的间隔短回文重复(CRISPR)序列特异性引物,将从临床分离的大肠埃希菌株作为模板,采用PCR扩增方法筛选含有CRISPR系统的大肠埃希菌;利用噬菌斑法从医院未经消毒处理的污水中分离大肠埃希菌噬菌体,经过PEG沉淀的方法浓缩得到高滴度的噬菌体,再用该筛选噬菌体感染上述含有CRISPR的大肠埃希菌以筛选耐受该噬菌体的大肠埃希菌菌株。最后从70株大肠埃希菌中筛选到42株含有CRISPR序列的菌株,然后采用噬菌斑法分离到1株大肠埃希菌E.coli 147-30的裂解性噬菌体IME-EC1,在此基础上利用E.coli 147-30筛选到1株耐受噬菌体IME-EC1的大肠埃希菌菌株,命名为E.coli 147-30R1。

• 单位
  军事医学科学院; 军事医学科学院附属医院; 病原微生物生物安全国家重点实验室; 安徽医科大学