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摘要
目的 体外建立人肝癌艾洛替尼（ｅｒｌｏｔｉｎｉｂ）耐药的细胞株 ＨｅｐＧ２／ｅｒｌｏｔｉｎｉｂ，鉴定其生物学特性，并对其耐药机制进行初步探讨。方法 逐步递增艾洛替尼并最终给予艾洛替尼 ５０μｍｏｌ·Ｌ－１连续冲击ＨｅｐＧ２细胞 １２个月，建立 ＨｅｐＧ２／ｅｒｌｏｔｉｎｉｂ。磺酰罗丹明 Ｂ法检测 ＨｅｐＧ２／ｅｒｌｏｔｉｎｉｂ耐药倍数和耐药谱；测定细胞生长曲线并计算细胞增值时间；流式细胞术检测细胞周期；ＲＴＰＣＲ和 Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹法检测 ＨｅｐＧ２／ｅｒｌｏｔｉｎｉｂ细胞乳腺癌耐药蛋白（ＢＣＲＰ）基因和蛋白的表达；流式细胞术检测细胞表面 ＢＣＲＰ蛋白表达。结果经过 １２个月艾洛替尼诱导的 ＨｅｐＧ２耐药细胞，艾洛替尼的 ＩＣ５０值为（７２．３±６．１）μｍｏｌ·Ｌ－１，艾洛替尼对正常 ＨｅｐＧ２细胞的 ＩＣ５０值为（１０．５８±０．３３）μｍｏｌ·Ｌ－１，耐药倍数为６．８±０．７，说明 ＨｅｐＧ２／ｅｒｌｏｔｉｎｉｂ为艾洛替尼耐药细胞株。ＨｅｐＧ２／ｅｒｌｏｔｉｎｉｂ对顺铂、多柔比星、米托蒽醌和拓扑替康的 ＩＣ５０均大于正常 ＨｅｐＧ２细胞的ＩＣ５０，说明产生交叉耐药性。ＨｅｐＧ２细胞和 ＨｅｐＧ２／ｅｒｌｏｔｉｎｉｂ细胞的群体倍增时间分别为（２０．７±３．３）ｈ和（２６．７±１．２）ｈ，耐药细胞倍增时间延长。与 ＨｅｐＧ２细胞相比，ＨｅｐＧ２／ｅｒｌｏｔｉｎｉｂ的 Ｓ期细胞比例明显增高（Ｐ＜０．０５），Ｇ０／Ｇ１期细胞比例明显降低（Ｐ＜０．０１）；ＨｅｐＧ２／ｅｒｌｏｔｉｎｉｂ细胞中 ｂｃｒｐ基因和 ＢＣＲＰ蛋白表达显著升高（Ｐ＜０．０５）。结论 建立的 ＨｅｐＧ２／ｅｒｌｏｔｉｎｉｂ具有耐药细胞的特征和生物学特性，其耐药机制与 ＢＣＲＰ蛋白的上调有关。
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