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摘要
背景以往视网膜血管消化铺片法仅能够获得部分视网膜血管,无法客观评价全视网膜血管的病理改变,因此进一步获得完整的视网膜血管网是相关疾病实验研究和临床研究的基础。目的 在国外对全视网膜血管消化铺片技术的基础上进行改良,建立全视网膜血管的铺片方法。方法 30只健康Wistar大鼠随机数字表法分为模型组和对照组,模型组20只大鼠用溶于0.05 mmol/L柠檬酸缓冲液的质量分数1.25%链脲佐菌素(STZ)腹腔内注射法制作糖尿病模型,对照组10只大鼠以同样的方法注射等容量柠檬酸缓冲液。注射后8个月经左心室注射PBS 100 ml,剪开右心房使血液及PBS流出后注射质量分数4%多聚甲醛100 ml,摘除眼球,将完整剥离的大鼠视网膜先进行胰蛋白酶消化,然后剥离玻璃体及内界膜,去除视网膜神经组织,得到完整的视网膜毛细血管网,平铺于载玻片上,将视网膜毛细血管网以视盘为中心划为内、中、外3个区域,采用盲法在光学显微镜下判定和计数中间区域影周细胞及无细胞血管。结果视网膜铺片显示,大鼠的视网膜血管为全血管型,可见放射状的视网膜中央动脉与视网膜中央静脉主干及逐级分支结构、小动脉与小静脉之间表浅层和深层的毛细血管网。周细胞略突出于血管管壁,在其形成影周细胞时,原有的细胞核缺失。无细胞血管的管径为邻近毛细血管管径的20%以上,并且在整个血管上无细胞核和影周细胞。结论全视网膜消化铺片技术能够提供实验所需的完整视网膜毛细血管网,配合细胞计数方法 ,能够较好地评价视网膜的形态改变,并为视网膜血管和管壁细胞的定量分析提供有利条件。
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单位首都医科大学附属北京同仁医院
