蛋白质酪氨酸激酶2通过PI3K/AKT/Gsk3b信号调控Tau磷酸化

作者：柳正; 王朝晖

来源：标记免疫分析与临床, 2022, 29(03): 464-470.

DOI：10.11748/bjmy.issn.1006-1703.2022.03.022

• 蛋白质酪氨酸激酶2
• 微管结合蛋白
• 磷脂酰肌醇-3-激酶
• 蛋白激酶B
• 阿尔茨海默氏病

目的 探究蛋白质酪氨酸激酶2(protein tyrosine kinase, Pyk2)在学习记忆障碍小鼠模型中的表达及对神经元细胞Tau蛋白磷酸化的影响和分子机制。方法 免疫组化检测APPswe/PS1ΔE9(APP/PS1)双转基因AD和WT小鼠脑组织Pyk2蛋白表达；免疫印迹检测Pyk2、Tau5、Tau46、CP13、AT180、PHF-1、12E8和AT270蛋白表达；免疫印迹检测SHSY-5Y细胞共转染pcDNA6.2-Pyk2-GFP和pcDNA6.2-hTau(2N4R)-V5质粒24h后Tau5、Tau46、CP13、AT180、PHF-1、12E8和AT270蛋白表达；包装PLOK1-Pyk2 shRNA慢病毒，转染SHSY-5Y细胞构建Pyk2敲低细胞系，转染hTau(2N4R)质粒24h后，Western blot检测Tau5、Tau46、CP13、AT180、PHF-1、12E8、AT270、P110α、P110β、P85α、p-P85α、AKT、p-AKT(Ser473)、p-AKT(Thr308)、Gsk3β和p-Gsk3β(Ser9)蛋白表达。结果 与WT组相比，APP/PS1双转基因AD小鼠皮质和海马组织中Pyk2蛋白表达明显增加。海马CA1和CA3功能区Pyk2蛋白表达明显增加。海马DG功能区Pyk2蛋白表达明显减少。与WT组相比，APP/PS1双转基因AD小鼠海马组织中Tau5、Tau46 CP13[Phospho-Tau (Ser202)]、AT180[Phospho-Tau (Thr231)]、PHF-1[Phospho-Tau (Ser396/404)]、12E8[Phospho-Tau (Ser262/356)]和AT270[Phospho-Tau (Thr181)]蛋白表达明显增加。与转染0.6μg Tau-V5相比，共转染0.6μg Tau-V5和0.3μg Pyk2-GFP组的V5、Tau5、Tau46 CP13[Phospho-Tau (Ser202)],AT180[Phospho-Tau (Thr231)]和AT270[Phospho-Tau (Thr181)]蛋白表达没有明显变化。共转染0.6μg Tau-V5和0.3μg Pyk2-GFP组的PHF-1[Phospho-Tau (Ser396/404)]和12E8[Phospho-Tau (Ser262/356)]蛋白表达明显增加。与转染1.0g Tau-V5的WT SHSY-5Y细胞相比，共转染1.0g Tau-V5和Pyk2 KDSHSY-5Y细胞组的V5、Tau5、Tau46、CP13[Phospho-Tau (Ser202)]、AT180[Phospho-Tau (Thr231)]和AT270[Phospho-Tau (Thr181)]蛋白表达没有明显变化。PHF-1[Phospho-Tau (Ser396/404)]和12E8[Phospho-Tau (Ser262/356)]蛋白表达明显减少。与转染1.0g Tau-V5的WT SHSY-5Y细胞相比，共转染1.0g Tau-V5和Pyk2 KD SHSY-5Y细胞组的P110β、P85α、p-AKT(Thr308)、AKT、和GSK3β蛋白表达没有明显变化。p-P85α、P110α、p-AKT(Ser437)和p-GSK3β(Ser9)蛋白表达明显减少。结论 Pyk2在雄性APP/PS1双转基因AD小鼠模型中高表达，且Pyk2通过PI3K/AKT/Gsk3b信号调控Tau蛋白PHF-1[Phospho-Tau (Ser396/404)]和12E8[Phospho-Tau (Ser262/356)]磷酸化。

• 单位
  武汉科技大学; 神经内科