利用流式细胞仪鉴定青钱柳倍性方法的建立及应用

作者：宋子琪; 卞国良; 林峰; 胡凤荣; 尚旭岚^*

来源：南京林业大学学报(自然科学版), 2023, 1-13.

• 青钱柳
• 倍性鉴定
• 流式细胞术
• 细胞核裂解液
• 内标法

【目的】利用流式细胞仪检测青钱柳的染色体倍性，为青钱柳种质鉴定及遗传育种研究提供技术支持和基础数据。【方法】以青钱柳叶片为材料，比较了裂解液种类、离心处理和叶片保存方式对倍性检测效果的影响，并利用建立的方法对1395份青钱柳种质资源的倍性进行检测。【结果】mGb裂解液的裂解效果最好，峰图质量最优。细胞核悬浮液过滤后可直接染色后进行测定，无需离心。4℃冷藏叶片的测定效果最佳，保存时间以7 d为宜。硅胶干燥样本测定效果优于冷冻，硅胶干燥保存时间以150 d为宜。100份试验样本的CV值为2.13%～5.04%，倍性估算值为1.80～2.40的样本判断为二倍体，倍性估算值为3.60～4.20的样本判断为四倍体。倍性估算值为3.00±0.40时，需采用与初判倍性相同的参照样本进行第二次标定。对1395份青钱柳种质资源进行倍性鉴定，共检测出二倍体104份，四倍体1291份。【结论】本研究建立的青钱柳流式细胞分析倍性的方法为：取参照样本和待测样本叶片各0.50～1.00 cm2，加入1 mL的mGb裂解液中混合切碎，过滤后加入20 μL PI染色1 min即可上机检测。对于倍性估算值异常的样本，采用二次标定法可快速确定其倍性，该方法操作简单、高效准确，为青钱柳种质倍性鉴定提供了有效方法。

• 单位
  中国科学院南京土壤研究所; 南京林业大学; 南方现代林业协同创新中心