切割Fas mRNA核酶的构建及其体内外切割活性的鉴定

作者：张敏; 刘芳; 游泳; 何伟; 邹萍; 童允洁; 刘凌波; 肖娟

来源：中国生物化学与分子生物学报, 2004, 20(05): 643-647.

DOI：10.3969/j.issn.1007-7626.2004.05.014

• 核酶
• Fas
• Yac-1
• 凋亡
• 肿瘤免疫

白血病细胞表面可高表达FasL ,诱导表达Fas的T细胞凋亡 ,从而降低其抗白血病的作用 .以高表达Fas的小鼠淋巴瘤细胞系Yac 1作为模型 ,设计并合成了针对FasmRNA 5 96位点的锤头状核酶基因 ,用T7/SP6体外转录系统检测了该核酶对FasmRNA的体外切割效率 ,通过电穿孔转染法将其导入Yac 1细胞 ,通过RT PCR、Western印迹法检测细胞上Fas的表达 .细胞经抗Fas的抗体作用后 ,通过MTT法测细胞的增殖 ,annexin Ⅴ凋亡检测试剂盒测细胞凋亡 .该核酶体外切割活性达6 0 % ,且能有效降低细胞表面Fas的表达 ;细胞经抗Fas的抗体作用后 ,转染核酶的细胞增殖活性较对照增高 ,而凋亡率明显降低 .结果表明 ,构建的切割FasmRNA核酶在体内外均具备良好的切割FasmRNA的活性 ,使细胞免于Fas途径的凋亡 ,为研究抑制T细胞的凋亡从而增强其抗白血病效应提供实验基础 .

• 单位
  华中科技大学同济医学院附属协和医院